【佳学基因检测】TCRgamm/delta免疫细胞疗效的DNA解码

人类V_γ9V_δ2 T细胞是一种独特的T细胞类型，近期对V_γ9V_δ2 T细胞的研究数据强调了它们在癌症免疫治疗中的潜在相关性。V_γ9V_δ2 T细胞具有双重特性，因为它们既是抗原呈递细胞，也对癌细胞具有细胞毒作用。大部分V_γ9V_δ2 T细胞在共受体CD4和CD8上均呈阴性，只有20-30%的细胞表达CD8。尽管它们大多被忽视，但少部分V_γ9V_δ2 T细胞也表达共受体CD4。作者在这里显示，CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞占外周血V_γ9V_δ2 T细胞的0.1-7%。这些细胞可以通过使用來普酸、帕米酸或与IL-2和饲养细胞来 扩增。与大多数传统的CD4⁺ αβ T细胞不同，CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞具有强大的细胞毒性，可以杀死癌细胞。这里通过对待以來普酸的不同组织来源的癌细胞株（包括乳腺癌、前列腺癌和黑色素瘤细胞株）的杀伤来展示这一点。值得注意的是，CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞的杀伤能力与CD56的共表达相关。

_γδ T细胞是一种T细胞亚群，它们表达由_γ链和_δ链组成的T细胞受体（TCR），而不是α和β TCR链。_γδ T细胞比αβ T细胞少得多，在人体外周血中，主要的_γδ T细胞亚群是V_γ9V_δ2 T细胞。这些细胞仅在人类和高等灵长类动物（以及羊驼）中发现，占外周血淋巴细胞的0.5-5%。

与需要HLA I类和II类分子进行抗原识别的αβ T细胞不同，V_γ9V_δ2 T细胞以HLA非限制方式应答一组称为磷酸抗原（pAg）的小型非肽分子。V_γ9V_δ2 T细胞识别pAg的确切机制尚未完全理解。V_γ9V_δ2 T细胞识别pAg的确切机制尚未完全理解。然而，pAg与丁酸酸分子，特别是丁酸酸3A1和2A1之间的相互作用，对V_γ9V_δ2 TCR正确识别pAg是必要且充分的。异戊烯焦磷酸（IPP）是一种pAg，是所有生物细胞利用的mevalonate途径和非mevalonate途径的终产物。为此，应激诱导的IPP水平升高可以激活V_γ9V_δ2 T细胞，而自然产生的IPP水平则不足以激活。癌细胞产生的IPP水平高于正常细胞，因此可以被V_γ9V_δ2 T细胞感知。这表明V_γ9V_δ2 T细胞可能具有作为应激感应T细胞的作用，并在识别癌细胞方面发挥潜在的关键作用。

V_γ9V_δ2 T细胞识别pAg的确切机制尚未完全理解。然而，pAg与丁酸酸分子，特别是丁酸酸3A1和2A1之间的相互作用，对V_γ9V_δ2 TCR正确识别pAg是必要且充分的。异戊烯焦磷酸（IPP）是一种pAg，是所有生物细胞利用的mevalonate途径和非mevalonate途径的终产物。为此，应激诱导的IPP水平升高可以激活V_γ9V_δ2 T细胞，而自然产生的IPP水平则不足以激活。癌细胞产生的IPP水平高于正常细胞，因此可以被V_γ9V_δ2 T细胞感知。这表明V_γ9V_δ2 T细胞可能具有作为应激感应T细胞的作用，并在识别癌细胞方面发挥潜在的关键作用。

V_γ9V_δ2 T细胞是人类外周血单个核细胞中最主要的也是了解最清楚的_γδT细胞亚群。这些细胞容易在佳学基因免疫细胞生产技术体系中容易获得极高的纯度和大幅度的扩增。佳学基因致力于开发细胞疗法，以补充现在的肿瘤浸润淋巴细胞疗法。如果显示出优越性，有可能替代它们。因此，佳学基因检测全面研究了V_γ9V_δ2 T细胞，因为它们可以直接从外周血单个核细胞中扩增，并且具有特异性杀伤癌细胞的能力。

在佳学基因的扩增培养的研究中，反复观察到一小部分CD4⁺_γδT细胞。由于V_γ9V_δ2 T细胞可以通过不同的nBP扩增，佳学基因研究了ZOL和PAM是否可以在体外不同程度地扩增CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞。在PAM和ZOL扩增的培养中发现了不同的CD4⁺细胞群体。然而，在CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞的频率上并没有明显差异，尽管在某些培养中ZOL似乎更有利于CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞。

为了评估CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞的存在是否表明它是人类外周血V_γ9V_δ2 T细胞的真实亚群，抑或只是体外扩增培养形成的独物细胞群，佳学基因对来自健康人的外周血单个核细胞进行了流式细胞术分析。佳学基因发现，在所有测试的健康人中确实存在少量但明显的CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞（占V_γ9V_δ2 T细胞的0.1-7%）。由于V_γ9V_δ2 T细胞，能够识别癌细胞，佳学基因检测在肿瘤患者的白细胞分离样本中寻找CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞。结果显示，在这些样本中也存在数量相近的独特细胞群体。因此，佳学基因免疫细胞治疗的研究清楚 地表明CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞不仅存在于佳学基因体外培养的免疫细胞中，这一功能细胞群同样也存在于癌症患者的免疫细胞中。

佳学基因解码的研究表明，人体内的αβ T细胞上的CD8分子通过与HLA-I分子相互作用发挥协同刺激作用。同样，对于CD4⁺αβ T细胞，CD4分子与HLA-II分子相互作用并向T细胞提供协同刺激信号。但是，没有基因解码的参与，关于CD8在V_γ9V_δ2 T细胞中的作用知之甚少，并且DN和CD8⁺ V_γ9V_δ2 T细胞之间的差异没有得到清晰的描述。因此，佳学解码基因更详细地研究CD8和CD4在V_γ9V_δ2 T细胞中的潜在作用。考虑到体内CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞的存在比例较低，佳学基因解码DNA试图通过体外扩增后再研究这些细胞，以便更全面地研究它们的表型和功能。佳学基因免疫细胞疗法利用FACS和REP获得了纯净的CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞亚群。这些经过培养的细胞在体外培养过程中保持纯度，并且CD4的表达稳定。在治疗性免疫细胞的究过程中，其他机构尝试了多次纯化CD8⁺ V_γ9V_δ2 T细胞。然而，与CD4相比，这并不成功。佳学基因研究了这些结果，因为与CD4⁺ T细胞（0.1-7%）相比，通过培养可以获得CD8⁺（20-30%）T细胞要多得多。在这些由其他机构开展的基因检测与免疫疗法的研究中，免疫细胞提供者制备了多个纯净的FACS分选CD8⁺ V_γ9V_δ2 T细胞培养物，但是在扩增后纯度降至45-85％，剩余的细胞为DN细胞。同样，佳学基因检测还观察到，分选的DN V_γ9V_δ2 T细胞在扩增后转变为含有1-20%的CD8⁺细胞。分选的CD8⁺和DN V_γ9V_δ2 T细胞培养物中仍无法检测到CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞。尽管在BD FACSAria流式细胞仪分选时使用了保守的筛选策略以去除其他细胞亚群（这一策略在分选CD4 _γδ T细胞时被证明是非常有效的），并且分选了五个不同的批次，但无法正式排除分选期间的污染。虽然佳学基因还没有完全证实这一理论，但基因解码表明，表明CD8⁺和DN V_γ9V_δ2 T细胞之间存在持续的转化，反之亦然。

正如佳学基因免疫细胞治疗的研究所揭示的那样，V_γ9V_δ2 T细胞可以在由nBP致敏后杀死癌细胞。对佳学基因的解码基因过程进行仔分析后发现，有一项DNA解码描述了CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞在健康人外周血单个核细胞和V_γ9V_δ2 T细胞的体外扩增培养存在，并证明这些培养后的T细胞表现出Th1细胞因子分泌谱。然而，除了细胞因子释放之外，没有进行功能性试验。利用纯净且稳定的CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞培养物，佳学基因发现在nBP致敏后，前列腺癌、黑色素瘤和乳腺癌细胞被这一免疫细胞杀死的情况。虽然传统的CD4⁺ T细胞通常不具有细胞毒性，但是基因解码研究发现了具有细胞毒性的CD4⁺ αβ T细胞，它们通过在HLA-II分子背景下识别肿瘤抗原直接杀伤肿瘤细胞，或者通过释放细胞因子激活其他免疫细胞间接杀伤。直接杀伤需要表达HLA-II分子，这在黑色素瘤中是一个常见现象；然而，大多数其他实体癌都对HLA-II呈阴性。其他研究机构还无法揭示CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞培养物识别癌细胞的识别元素的任何信息，这实际上可能依赖于多种分子。

CD56在许多细胞类型上表达，但佳学基因指出CD56的表达在自然杀伤细胞和细胞毒性T细胞上的表达最明显。在研究CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞的表型和功能过程中，佳学基因还研究了CD56分子的表达。CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞上CD56表达的呈出双模形式，而在REP培养中，所有的CD8⁺和DN V_γ9V_δ2 T细胞都是CD56⁺。区分CD56⁺和CD56- CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞培养物使佳学基因能够研究这些细胞的细胞溶解能力是否与CD56的表达相关。佳学基因的研究表明，CD56的表达与CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞培养物的细胞毒活性相关，如使用从五个健康人的针对前列腺癌细胞系的培养物显示出相似的结果。这说明表达CD56的V_γ9V_δ2 T细胞群体比CD56-亚群具有更强的细胞毒性效应，并且这种细胞毒性功能是在刺激增殖的过程中获得的。佳学基因的研究还发现CD56⁺ V_γ9V_δ2 T细胞能更有效地杀伤人类鳞状细胞癌细胞。此外，表达CD56的αβ T细胞具有更强的细胞毒性效应和促炎症细胞因子产生，如IFN_γ和TNFα]。DNA解码还观察到，表达CD56的V_γ9V_δ2 T细胞中，IFN_γ、TNFα和CD107a的细胞因子表达增加。然而，在DNAM-1、NKG2D和NCR的表达上没有发现差异。综上所述，佳学基因认为CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞杀伤能力与CD56的表达相关。

佳学基因免疫细胞疗效的基因解码研究了肿瘤活检样本（来自39种癌症的约18,000个样本），在影响肿瘤患者预后的22种种因素中，_γδ T细胞排在首位。尽管如此，V_γ9V_δ2 T细胞的临床试验显示出有限的临床成功。可能有很多原因，免疫细胞界对V_γ9V_δ2 TCR多样性的理解有限，对受体-配体相互作用的认识也受限，对V_γ9V_δ2 T细胞种群的功能多样性影响的低估也是一个问题。佳学基因发现，在V_γ9V_δ2 T细胞库中的克隆之间，肿瘤识别存能力变化是出奇地大，这表明V_γ9V_δ2 T细胞的多样性可能在功能上非常重要。V_γ9V_δ2 T细胞是人类胎儿中最早发育的T细胞之一，并且在青春期通过与微生物（即微生物教育）的个体接触，V_γ9V_δ2 T细胞的多样性逐渐降低。因此，每个成年人的_γδ T细胞库在_γδTCR多样性和可能的功能多样性方面都是独特的。因此，目前对V_γ9V_δ2 T细胞库内多样性的理解受到佳学基因关注。免疫能力基因解码的数据提供了关于存在于健康和癌症患者的V_γ9V_δ2 T细胞种群内的CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞了解，从而有助于更好地了解V_γ9V_δ2 T细胞的多样性。需要注意的是，在基因解码过程中，V_γ9V_δ2 T细胞培养物受到大量IL-2的影响。因此，这项研究的弱点在于作者无法排除CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞的反应性与CD56的相关性是否是由于体外使用高浓度IL-2引起的假象。需要进行其他研究以确定这些细胞是否在体内与免疫系统的独特功能相互作用，包括这些细胞是否在自发或治疗诱导的免疫反应中对癌症发挥作用。

免疫细胞的疗效研究表明V_γ9V_δ2 T细胞中有一小部分表达辅助受体CD4，佳学基因的数据支持了这一存在。基于免疫力大小的基因解码，CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞可以在健康人群和癌症患者的PBMC中找到，占外周血V_γ9V_δ2 T细胞的0.1％至7％。佳学基因描述CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞杀死癌细胞的能力，而且杀伤能力与CD56的表达相关。佳学基因开发了细胞毒性CD4⁺ V_γ9V_δ2 T细胞细胞的分离培养方法，获得了V_γ9V_δ2 T细胞的细胞毒性的标记。